作者简介
本文2019年发表在Plos pathogens, 通讯作者为王金星, 就职于山东省动物细胞与发育生物学重点实验室, 研究方向为无脊椎动物先天免疫, 主要研究对象为对虾.
摘要
受体结合的病毒可以通过直接释放基因组DNA到细胞或者通过胞吞(endocytosis)途径进入细胞后进行基因的表达,尤其对于DNA病毒和部分RNA病毒. 受体在病毒的感染中起了关键作用. 白斑综合征病毒(WSSV)的真正受体一直未确定. 本文鉴定了斑节对虾(Marsupenaeus japonicus)中的WSSV受体, 一种多聚免疫球蛋白受体样蛋白(MjplgR).1. MjpIgR在所有组织表达；2. WSSV感染引起其mRNA和蛋白表达水平增加；3. 敲降MjpIgR或使用其抗体封闭，导致WSSV感染效率降低，过表达MjpIgR使WSSV感染效率增加；4. MjpIgR能够独立的使非易感细胞变得对WSSV易感。MjpIgR胞外结构域结合WSSV的VP24胞膜蛋白，胞内结构域则结合钙调蛋白（calmodulin）。WSSV进入细胞依赖pIgR-Cam-Clathrin通路。
实验结果
MjpIgR在WSSV攻毒后表达上调
分离鉴定了MjpIgR，GenBank Accession no. MH051890。在各组织均有表达，在WSSV攻毒后上调。表明MjpIgR和WSSV感染相关。
MjpIgR过表达能增加WSSV感染
敲降/过表达后对WSSV蛋白, DNA量, 颗粒数及存活时间统计.
MjpIgR能在体内外形成多聚体形式,能在WSSV感染后进入细胞质(向细胞质转移)
除了细胞定位变化,还检测了膜蛋白和胞质蛋白中含量的变化.
MjpIgR和WSSV在血细胞中的共定位
使用Dil标记了WSSV(有膜结构?), 使用免疫组化染色MjpIgR. 使用流式对相对数量进行了统计.
MjpIgR过表达使非敏感细胞(HEK 293T)变得易感
过表达后检测了细胞中WSSV基因组水平. 但是, 这部分基因组可能仅是表面结合, 而WSSV病毒颗粒并未进行内吞,对应的缺少细胞内免疫组化.
MjpIgR-SC结合VP24区域
使用GST-His pull-down能和MjpIgR(SC区)结合的区域为VP24蛋白, 三个IG区域均负责结合.
MjpIgR-钙粘蛋白-网格蛋白-AP2通路介导了WSSV内吞
MjCam表达, 对WSSV响应变化, MjCam敲降对存活率的影响. 表达了MjpIgR包内结构,通过pulldown研究其和MjCam的相互作用, 使用MjCam的拮抗剂处理, 发现WSSV含量降低.
网格蛋白(Mjclathrin)抑制剂CPZ(chlorpromazine).CPZ以及Mjclathrin敲降在抗WSSV中的作用. 过表达MjpIgR同时注射CPZ(通路验证常见思路)发现MjpIgR过表达的效果被抑制.